THZ恒温振荡器凭借精准的温度控制与稳定的振荡性能,是细菌、真菌、酵母菌等微生物扩增实验的核心设备。不同微生物的生长特性差异显著,对振荡频率、温度、环境湿度等参数要求各不相同。
一、细菌扩增实验实操:适配快速繁殖的参数与操作。细菌(如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌)繁殖速度快,偏好有氧或兼性厌氧环境,扩增实验需重点控制温度与振荡强度以保证溶氧充足。
1.设备选型:大批量扩增优先选用大容量机型,可承载多组三角烧瓶同步实验;小批量验证选用台式机型,操作便捷且能耗较低。
2.核心参数设置:温度方面,多数常见细菌最适生长温度为37℃,控温精度需稳定在±0.1~0.3℃;振荡频率设置为150~220转/分,确保培养液充分混合、溶氧充足,避免细菌沉淀;定时功能根据细菌代时设定,一般扩增8~12小时,支持999小时长定时,可实现无人值守连续培养。
3.实操步骤:
①准备含适宜培养基的三角烧瓶,接种细菌菌液后密封(预留少量透气空间,或使用透气封口膜);
②调整THZ恒温振荡器托盘高度,将烧瓶均匀摆放(重载时需对称放置,避免振荡失衡);
③设定温度37℃、振荡频率180转/分,启动设备预热,待箱内温度稳定后放入样品;
④扩增过程中通过可视窗观察培养液状态,若出现浑浊度异常需及时排查;
⑤实验结束后关闭设备,取出样品进行后续检测。
二、真菌扩增实验实操:兼顾菌丝生长与孢子繁殖的条件控制。真菌(如青霉菌、黑曲霉菌)生长周期较长,需控制较低振荡频率避免菌丝断裂,同时保证适宜温度与湿度。
1.设备选型:优先选用具备良好温度均匀性的机型,箱内各区域温差≤0.5℃,适合真菌菌丝均匀生长;若需控制湿度,可搭配箱内加湿配件(部分衍生机型支持)。
2.核心参数设置:温度根据真菌种类调整,多数真菌最适生长温度为25~30℃(如青霉菌28℃、黑曲霉菌30℃),控温精度±0.3℃即可满足需求;振荡频率设置为80~120转/分,低频率振荡可减少菌丝损伤,同时保证营养物质充分接触;定时范围一般为24~72小时,利用长定时功能实现连续培养。
3.实操步骤:
①选用带挡板的三角烧瓶(增强搅拌效果),装入真菌培养基并接种,采用透气封口膜密封以保证气体交换;
③设定温度28℃、振荡频率100转/分,启动设备,待温度稳定后放入样品;
④培养期间每日观察菌丝生长状态(如培养液是否出现菌丝球、浑浊度变化),必要时调整振荡频率;
⑤达到预设培养时间后,取出样品进行菌丝分离或孢子收集。

三、酵母菌扩增实验实操:平衡有氧代谢与增殖效率的关键设置。酵母菌(如酿酒酵母、毕赤酵母)为兼性微生物,扩增时需控制温度与振荡强度,兼顾有氧呼吸与增殖速度。
1.设备选型:实验室小规模扩增选用台式机型,操作灵活;工业级批量扩增选用大容量机型,提升实验效率。
2.核心参数设置:最适生长温度为28~30℃,控温精度需稳定在±0.2℃左右,避免温度波动影响增殖;振荡频率设置为120~180转/分,既能保证充足溶氧,又不会因振荡过强损伤酵母细胞;定时时间根据扩增目的调整,一般种子液扩增12~24小时,大规模发酵前扩增需48小时左右。
3.实操步骤:
①准备酵母专用培养基,接种后装入三角烧瓶(装液量不超过烧瓶容积的50%,保证足够气液接触面积);
②采用无菌操作密封烧瓶,预留透气通道;
③设定THZ恒温振荡器参数:温度29℃、振荡频率150转/分,启动预热;
④样品放入后,利用设备LED数字显示实时监控温度与振荡状态;
⑤扩增过程中检测培养液OD600值,判断酵母生长密度,达到对数生长期后终止培养。
四、三类实验共通注意事项:设备操作与实验安全规范。
1.设备预处理:实验前需清洁THZ恒温振荡器托盘与箱内空间,用75%酒精擦拭消毒,避免交叉污染;检查设备是否正常运行,包括温度显示、振荡稳定性、报警功能等。
2.样品放置规范:无论选用哪种机型,烧瓶均需对称摆放,重载时确保托盘平衡,防止振荡过程中设备移位或损坏;装液量需严格控制(一般为烧瓶容积的1/3~1/2),避免振荡时培养液溢出。
3.参数调整禁忌:实验过程中禁止随意更改温度或振荡频率参数,如需调整需先暂停设备,待温度稳定后再重启,避免微生物生长环境突变导致扩增失败。
4.安全防护:设备运行时禁止打开箱门,防止温度骤变;实验结束后先关闭设备,待托盘停止振荡后再取出样品,避免烫伤或样品洒漏;定期维护设备,清理箱内残留培养液,检查无刷电机运行状态。
THZ恒温振荡器在细菌、真菌、酵母菌扩增实验中的实操核心,是根据不同微生物的生长特性精准匹配设备参数,并严格遵循设备操作与实验安全规范。